Falsos positivos y falsos negativos

Tiene que tenerse en cuenta la presencia de sustancias interferentes en un alimento para evitar los falsos positivos o los falsos negativos.

Sensitividad.- Es usualmente medida en términos de parámetros previamente definidos tales como recuperación y exactitud.

Especificidad.- Es la capacidad de un método para medir solo lo que tiene que medir.

Ensayo de Rudeza.- La variabilidad inherente del método de conteo de microorganismos generalmente anula el efecto de pequeños cambios en las condiciones de operación y del medioambiente, tales como la temperatura de incubación. El estudio de cada cambio es dejado a la experticia y discreción del laboratorio primario.

Comparación con los métodos de referencia existentes.

Es obligatoria la comparación con los Métodos Oficiales. 

Parámetros adicionales para métodos microbiológicos cuantitativos.

Matrices

Se requiere una matriz cuantitativa para cada categoría de alimentos. En un estudio precolaborativo cuantitativo de métodos oficiales, se requieren 20 matrices si la aplicabilidad es para todos los alimentos, y 5 matrices si la aplicabilidad es para una sola categoría de alimentos, tales como carnes, productos diarios, o vegetales. Se requiere un número apropiado intermedio de matrices si la aplicabilidad es menor que todos los alimentos pero mayor a una categoría de alimentos.

Cepas de analito microbiológico.

El ensayo puede ser realizado con una célula inoculada viable y/o con células con un contaminante natural. Se ha recomendado que 10 cepas diferentes de microorganismos relevantes sean estudiadas como cantidades agregadas o como analitos incurridos. Sin embargo si solo una cepa particular o serotipo es el analito de interés, puede ser suficiente una cantidad menor (p. Ej. 5). Pero es preferible que el laboratorio que conduce el estudio tenga cepas apropiadas para las matrices involucradas, que sean pocas para ser estudiadas en profundidad y que, preferiblemente, se use solo una cepa por matriz. Deben evitarse cepas mezcladas a pesar de que un método de amplia categoría esté involucrado tal como para el conteo de mohos y levaduras, bacterias coliformes o bacterias gram negativas. Cuando los segmentos de inclusividad/exclusividad son realizados en los Métodos Oficiales de estudios precolaborativos, se recomiendan 30 - 40 cepas de analitos y 10 -20 cepas de no analito.

Niveles.

Se requieren tres o más niveles de agregación de microorganismos en la matriz para representar el rango establecido del método. Cada nivel (sin agregar, bajo medio y alto) debería analizarse al menos 5 veces por matriz. Debe usarse el analito en al menos 15 muestras por matriz cubriendo el rango atribuido. En estudios precolaborativos cuantitativos de métodos oficiales, son necesarias de 20 a 30 matrices diferentes. Los ensayos estadísticos aplicables son la regresión, la correlación y el ensayo t-apareado.

Microorganismos interferentes

Las matrices, generalmente tienen una microflora natural. Si una microflora natural interfiere con el método, la matriz debe ser removida de la lista de matrices aplicables. Se usan matrices con altos y bajos niveles de microflora. Idealmente la microflora debería exceder los microorganismos indicadores en al menos 2 a 3 logaritmos en las muestras con alto nivel de microflora.

Criterios de aceptación.

Debe establecerse la concordancia entre ensayos y los métodos convencionales a un nivel de p = 0.05. Corrientemente no hay criterios impresos para la aceptación de un método sobre las bases de tipos de datos estadísticos (regresión, correlación, y ensayo t-apareado), que son desarrollados en estudios precolaborativos de los métodos oficiales.