Ensayos Microbiológicos Cuantitativos.

En este apartado se describe el estudio de los métodos de conteo de células, incluyendo los conteos de UFC y NMP. No se incluyen los ensayos microbiológicos de antibióticos, ensayos microbiológicos de nutrientes, ni los ensayos de toxina.

Características de rendimiento

Exactitud

Usualmente se determina comparando el resultado del método del ensayo del conteo con los de un Método Oficial o un método convencional si no existe método oficial., en el rango de conteo aplicable.

Recuperación

Esta es la fracción del analito microbiano añadido a una muestra de ensayo (fortificado o muestra sembrada) antes del análisis, que es medido (recuperado) por el método ensayado. Este puede, en teoría ser corregido por cualquier contaminante natural, presente en el analito en la muestra sin fortificar. Con el microorganismo incurrido, la recuperación es la fracción del analito microbiano contado por un método estándar.

Curva de Calibración.

Generalmente no es aplicable.

Linealidad

En general, los métodos de conteo microbianos conducen a resultados proporcionales a la concentración del analito, si las muestras son cuantitativamente diluidas a una concentración en el rango apropiado. Este rango es para dar 20-30 a 200-300 ufc por placa cultivada en un medio de cultivo sólido. Sujeto a unos bordes estadísticos más amplios del método, aplica la linealidad del método de NMP.

Limite de detección.

El contenido más bajo que puede ser medido es 10 - 100 ufc/g en métodos de placa para matrices de alimentos. Algunas veces el tamaño de las partículas de alimentos pueden interferir con la visibilidad de las colonias. En el método de NMP, es de 0.03 ufc/g o menor, dependiendo del número de tubos y el tamaño mayor de la muestra cultivada pero los límites de confianza son amplios en el método de 3 a 5 tubos.

Limites de cuantificación y determinación.

Es la menor cantidad de analito en la muestra que puede ser determinada con adecuada precisión y exactitud. En el método de plaqueo convencional es de 2000 a 3000 ufc/g de alimento porque cerca de 0.01 g de alimento puede ser plaqueado sin dificultad de detección de colonias.

El límite de determinación, que se define como el más bajo contenido de analito que estando presente, debería ser detectado y a la vez identificado, es cercano a 100 ufc/g en la metodología del plaqueo y tan bajo como 0.01 ufc/g en la metodología de NMP.

Precisión

Repetibilidad Intralaboratorio

Los ensayos deben ser realizados al menos por lotes duplicados de tipos de productos específicos, con un mínimo de 5 replicas por lote por nivel microbiano. Para estudios precolaborativos de Métodos Oficiales, se requieren 4 niveles (control, bajo, medio y alto).

Reproducibilidad Interlaboratorio.

Se requiere un mínimo de 2 laboratorios. Las muestras estudiadas por diferentes laboratorios necesitan ser preparadas centralmente o incluso ser del mismo lote, a pesar de que se requieren estadísticas de verdadera reproducibilidad. Se compara el promedio del conteo logarítmico (en base 10) y los valores sr obtenidos por cada laboratorio para cada matriz de lote ensayada. Se compara los respectivos valores de DERr (CVr).