El substrato para el cultivo de pleurotus spp es un tipo especial de composta que se obtiene a través de un proceso fermentativo de materiales lignocelulósicos activado con fuente de nitrógeno que le proporciona al hongo una selectividad química (contenidos finales de N = 2-3% y C/N = 16-19) y una selectividad biológica (con un contenido rico de una microflora de bacterias, actinomicetos y hongos termófilos).

Independientemente del método que se elija para lograr una correcta preparación del substrato, existe una serie de operaciones de pre-tratamiento que por lo general, suelen ser comunes a la mayoría de los métodos más empleados.

Al comienzo de la preparación del substrato para cultivar pleurotus spp se requiere, por lo general, triturar, moler o picar las materias primas de base (paja, heno, hojas, tallos). La operación de troceado o picado resulta más eficaz, y se ejecuta con mayor rapidez, con los materiales en seco. Ferri (1985).

El tamaño de las partículas y el contenido de agua son dos decisiones primarias que debe tomar el operador, y de cuyo resultado depende el delicado equilibrio que hay que mantener con las tres fases, sólida, líquida y gaseosa, en todo el substrato. Un tamaño de partícula de 2 ó 5 cm y un contenido de humedad en torno al 70-75% son los valores más citados y los que proporcionan la mejor estabilidad y proporciones entre las tres fases comentadas. Para tratar de humectar la paja correctamente existen varios sistemas, según el tamaño de instalaciones.