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Capítulo 1:

 Cultivos de referencia

(Ref. Norma ISO 17025)

Los cultivos de referencia

Es el conjunto constituido por cepas de referencia, cepas de reserva y cepas de trabajo.

Un laboratorio de microbiología cuenta con cultivos de referencia, a fin de acreditar o conservar la acreditación de un ensayo. Así, el número, la elección del género y su especie son dependientes de los ensayos que se elaboran y de las necesidades que asumen estos.

La necesidad de los cultivos de referencia:

La necesidad de los cultivos de referencia parte de demostrar una "trazabilidad". Para que ello se lleve a cabo, se diseña y se sigue un protocolo documental a fin de que se mantenga un buen uso y manejo de dichos cultivos.

Los procedimientos que han de observarse de forma estricta son:

·          La evaluación de la calidad de los medios de cultivo.

·          La práctica de controles de calidad interno durante la ejecución de los ensayos.

·          La realización de controles de calidad de reactivos.

·          Pruebas confirmatorias, tales como la "prueba de CAMP"

·          La validación de métodos.                                                                                                                                

Requisitos de los cultivos de referencia

Para que se cumpla un cultivo de referencia debe darse una serie de requisitos. Estos son:

·          Células microbianas capaces de crecer; dándose una viabilidad.

·          Cepas de referencia. Las colecciones aprovisionarán las cepas con instrucciones para su recuperación.

·          Debe tratarse de un cultivo puro. Ha de observarse la pureza de la misma.

·          La estabilidad genética. Es requisito fundamenta el que se de la estabilidad y el mantenimiento de características genotípicas y fenotípicas.

          En todos los casos la manipulació ny modo de conservaciónde las cepas debe tener especial prevención sobre:

·          El deterioro de las cepas.

·          La contaminación cruzada.

·          Mutaciones, deterioro o alteración de las características típicas de las cepas.

Asimismo, su crecimiento característico debe ser documentado en lo que respecta a cada medio sobre el que se manipula como cepa control.

El material de referencia

Se denomina material de referencia al material o sustancia que ostenta valores de una o más propiedades suficientemente homogéneas y bien conocidas que permite su uso en la calibración de aparatos, la evaluación de un método de medición o la atribución de valores a estos materiales.

Las cepas de referencia

A fin de demostrar la trazabilidad, las cepas de referencia deben obtenerse directamente de una colección con la reseña nacional o internacional de cultivo de referencia reconocido.

Según la "ISO 11133-1:2000", son:

·          microorganismos definidos, por lo menos a nivel de género y especie

·          catalogados

·          muy caracterizados

·          de origen conocido

Dichas cepas son distribuidas y presentadas comercialmente liofilizadas; asimismo, los orga nismos de acreditación son los encargados de considerar válida la fuente de procedencia de la cepa a fin de que se cumpla con el requisito de prevenir mutaciones, deterioro o alteración de las características típicas de las cepas.

El número de repiques a partir de la cepa de referencia a de ser limitado, aceptándose hasta cinco repiques como máximo a partir de dicha cepa de referencia.

Asimismo, toda cepa adquirida por una vía que no sea la propia colección, no podrá mencionarse utilizando el número que tienen en esa colección, sino únicamente como derivada de la cepa de colección.

Adquisición de las cepas de referencia

La adquisición de las cepas de referencia pueden provenir de:

·          Obtención directa a partir de una colección nacional e internacional reconocida.

·          Proveedores comerciales certificados por ISO que 9001. Comercializan repiques de cepas de referencia adquiridas en una colección reconocida. Generalmente el 3er o 4º repique.

En dicha adquisición se debe mantener sus recipientes originales; siendo de obligado requerimiento en la recepción o compra de insumo, el certificado de origen, donde conste el número de repique y el origen entre otros.

Proveedores de cepas de referencia

1ª. Opción:

·          ATCC (American Type Culture Collection).

·          SVM (Foundation for the Advancement of Public and Environmental Protection)

·          CECT (Colección española de cultivos tipos).

·          CNCM. (Collection Nationale de Cultures de Microorganismes) Institut Pasteur

·          Etc.

2ª. Opción:

Los proveedores acreditados por ISO 9001 que llevan a cabo repiques a partir cepas adquiridas en la colección reconocida.

Oxoid Companie.

Capítulo siguiente - Cepas de colección de referencia

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