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Capítulo 5:

 Medios de cultivo

2.4.1.2 Presentación de los medios de cultivo.

Los medios de cultivo se utilizan en una de las formas siguientes:

* Medios Líquidos o caldos de cultivo. Son los que una vez preparados se mantienen en estado líquido. Suelen utilizarse para realizar la suspensión de disolución de la muestra a analizar con el fin de conseguir la disolución madre. Pueden presentarse en bolsas de 5 litros, en frascos de 250 ml, o en tubos de un solo uso.

* Medios sólidos. Contiene un agente espesante, por lo general agar a una concentración del 1,5 %. El agar es un derivado de algas. Es sólido a temperaturas inferiores a los 40 o 45ºC.

* Medios semisólidos. Tienen una consistencia intermedia entre la de los anteriores. Suelen contener una concentración de agar del 0,7 %.

Tal como hemos apuntado, la mayoría de los medios de cultivo se compran hoy en día ya preparados. Unos llegan para su uso en distintas presentaciones, y otros deshidratados. La ventaja de los primeros es su comodidad y la desventaja, que su plazo de conservación es corto. Los deshidratados, en cambio, pueden conservarse bastante más tiempo, pero hay que prepararlos antes de usarlos.

2.4.1.3 Preparación y conservación de medios de cultivo.

Los medios de cultivo que no se adquieren listos para su uso deben prepararse en el laboratorio (siguiendo las indicaciones de los fabricantes en el caso de los que parten de medios comerciales deshidratados). Posteriormente se esterilizan, se revisan y se conservan.

* Consejos de preparación:

- Cuando peses medios de cultivo deshidratados, ten cuidado de no inhalar el polvo desprendido. Algunos contienen sustancias tóxicas para las personas.

- Los medios se preparan en frascos ISO de capacidad suficiente para facilitar la agitación y la completa disolución de los distintos componentes. Pero también se pueden utilizar autopreparadores, si el volumen de medio que se necesita es superior a 2L.

- Añade paulatinamente el agua necesaria, evitando formar una masa compacta. Todos los medios deshidratados se preparan añadiendo agua desionizada o destilada de calidad comprobada.

- La solución o la suspensión que se haga debe ser totalmente homogénea. Si necesita calentarse, hazlo lo mínimo posible. Es recomendable calentar el agua a 50-65 ºC, antes de añadirla porque eso favorece notablemente la disolución. Los componentes deben agitarse mientras se calientan, sobre todo los agares.

* Esterilización

Algunos medios de cultivo se esterilizan con autoclave, otros al baño María y otros mediante filtración por membrana. Todos ellos son procedimientos de esterilización. En todo caso las indicaciones del fabricante te indicarán que procedimiento debes seguir en cada uno de los medios comerciales deshidratados.

* Revisión

Es importante comprobar que el medio que acabas de preparar se comporta correctamente. Las pruebas que debes hacer para tener seguridad son:

1. Revisión macroscópica: Se examina el medio a simple vista, atendiendo a su color, a su opalescencia y transparencia, a la humedad en las placas ya preparadas y a la posible aparición de precipitados.

2. Vigilancia de Ph: Porque la mayoría de los microorganismos se desarrollan mejor en medios con un pH neutro.

3. Vigilancia de la esterilidad: Se lleva a cabo incubando a 30 ºC durante 72 horas una pequeña porción, representativa del lote de medio preparado, para comprobar que allí no crecen gérmenes.

4. Prueba de la eficacia: En una pequeña porción representativa del medio preparado, se inocula un microorganismo - normalmente el propio fabricante aconseja el más adecuado- y se cultiva. Así se comprueba si en el medio de cultivo preparado ese microorganismo se desarrolla correctamente.

* Conservación
   
Cada lote de medio de cultivo, una vez preparado, esterilizado, revisado y en su presentación final, se identifica mediante una etiqueta con el nombre del medio de cultivo correspondiente, el número de lote y la fecha de caducidad.

Se almacenan en frigorífico a 4ºC. No los guardes por debajo de 0ºC, porque eso altera la estructura del agar. Los medios preparados en placas se guardan en bolsas de plástico, precintadas con cinta adhesiva para preservarlos de la desecación, y se ponen en la nevera en posición invertida, para evitar la caída de gotas de condensación sobre el medio.

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